樣本收集及處理方法：

1. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織，剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

2. 細胞培養物上清：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3. 其它生物標本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測。

科研專用人骨橋素(OPN)ELISA檢測試劑盒組成：

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0、12.5、25、50、100、200 ng/mL

試劑的準備：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

三.   科研專用人骨橋素(OPN)ELISA檢測試劑盒的注意事項：

1） 充分混勻對保證反應結果很重要，在加液后請輕輕晃動整個96板孔，以保證混勻。

2） TMB溶液請勿接觸氧化劑或金屬，否則容易失效。

3） 加樣時請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。加樣過程中必須避免氣泡的產生。

4） 檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。

5） 洗滌過程非常重要，洗滌不充分會下降并導致結果誤差較大。

四．實驗中問題解答：

【檢測的結果沒有吸光度值或吸光度值很低】

可能造成的原因：1.使用的試劑盒已過有效期 2. 沒有充分回溫、孵育的溫度太低

上海軒澤康生物為您解答：建議更換有效期以內的試劑盒，使用同一批次試劑盒內的內容物并嚴格按照說明書步驟進行操作。在實驗操作的整個過程中仔細觀察恒溫箱的溫度。

【吸光度值偏高】

可能造成的原因：孵育溫度過高，反應時間過長。

上海軒澤康生物為您解答：建議調整孵育環境的溫度，如無法調整室內溫度請將顯色時間適當縮短，控制反應時間。

五. 質量保證及售后服務

一、買方嚴格按照盒子上注明的貯藏條件貯藏，因買方對產品保管不當而產生的產品質量問題由買方負責。

二、特別提示：我司出售的試劑盒均為科研試劑，嚴禁用于臨床診斷。

三、因運輸造成的貨物損壞，由賣方與運輸方協調解決，買方不承擔由此產生的損失。因不可抗力因素造成我司延期交貨或無法交貨的，我司將及時通知買方并給出解決方案。

四、試劑盒保證質量，保質期半年，請注意時效，在保質期內用完。我司提供業技術支持，如實驗有任何不明白的地方可以直接聯系我司技術人員。

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